推进BRAF基因突变检测 提高临床肿瘤诊疗水平

作为人类最重要的原癌基因之一，原癌基因BRAF突变驱动肿瘤细胞的增殖、生长和分化，尤其在结直肠癌、甲状腺乳头状癌、多毛细胞白血病、脑肿瘤和黑色素瘤中占比突出。目前检测到的BRAF突变已逾30种，其中V600E占80%以上，是最常见的BRAF激活突变。BRAF V600E突变可导致RAF/丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路的持续性激活，引起肿瘤细胞分化增殖、代谢、生长的改变。

日前，在“中华医学会病理学分会第二十一次学术会议暨第五届中国病理年会”期间，中国医学科学院肿瘤医院病理科应建明教授分享了BRAF基因突变检测在甲状腺癌、结直肠癌等实体瘤鉴别诊断、治疗指导及预后管理方面的重要意义，以及免疫组化BRAF V600E抗体检测方法的临床应用，旨在呼吁加强疾病管理，提高患者诊疗水平。

应建明教授表示：“在病理诊断中，BRAF V600E在多种肿瘤中均有表达，我们的研究及相关文献均表明，其对于多种肿瘤的预后管理、鉴别诊断及治疗等都有很好的临床价值，BRAF突变检测对肿瘤预后评估、靶向治疗等均意义重大。”

BRAF V600E突变检测助力结直肠癌的鉴别诊断、治疗指导和预后管理

根据世界卫生组织（WHO）数据，结直肠癌（CRC）位列男性常见恶性肿瘤的第三位和女性常见恶性肿瘤的第二位，大约5%-15%的结直肠癌会发生BRAF位点特异性突变，其中超过90%为BRAF V600E突变。

BRAF V600E可用于结直肠癌的鉴别诊断。BRAF V600E突变可以排除林奇综合征（LS），指示为散发型结直肠癌（SCRC）。BRAF V600E检测有效简化了林奇综合征的诊断流程，采用错配修复基因（MMR）蛋白免疫组化染色法对疑似患者进行筛查。若MMR蛋白表达正常，可排除LS；而在MMR蛋白表达缺失的情况下，需具体分析MLH1、MSH2、MSH6及PMS2四种蛋白的具体表达情况。如MLH1缺失，则进行BRAF突变分析，若为V600E阳性则预示着很可能患有SCRC。欧洲临床肿瘤协会（ESMO）和美国国立综合癌症网络（NCCN）指南建议，当MLH1基因缺失时，应检测BRAF V600E以排除SCRC。

此外，BRAF V600E还可帮助临床医生进行结直肠癌的预后管理和指导治疗。BRAF V600E突变会导致CRC患者预后不良的概率提升，预示着更低的总生存期，尤其对于晚期患者而言，V600E突变阳性预示预后非常差。尽管尚存在争议，目前有限的资料提示，V600E突变患者抗EGFR单抗治疗应答率明显低于BRAF野生型患者。

BRAF V600E检测有效辅助甲状腺癌诊疗及预后

作为最常见的内分泌恶性肿瘤，近三十年来，甲状腺癌在全球范围内发病率增加了3倍，已成为发病率上升最快的实体瘤。依据病理分型，甲状腺癌包括甲状腺乳头状癌（PTC）、甲状腺滤泡状腺癌（FTC）、甲状腺未分化癌（ATC）及甲状腺髓样癌（MTC），其中PTC占80%-90%，主要包括经典型、滤泡型和高细胞型等亚型。

BRAF V600E突变发生在40%-70%的PTC中，而在FTC、MTC、嗜酸性细胞腺癌、腺瘤和良性甲状腺增生中极少发现，因此BRAF V600E可作为PTC临床鉴别诊断指标。因BRAF V600E与PTC恶性特征具有相关性，与肿瘤大小等高风险特征呈正相关，可辅助PTC诊断。在PTC的诊断中，甲状腺细针穿刺活检（FNAB）单独诊断其敏感性仅为63.3%，而采用FNAB与BRAF V600E联合检测，敏感性可提升至80%。美国甲状腺协会（ATA）管理指南建议，有甲状腺结节的患者在细胞学活检不确定时，建议使用分子标志物（如BRAF、RAS、RET/PTC等）进行辅助诊断。

BRAF V600E突变与PTC的侵袭性及不良预后有关，可为PTC治疗提供参考。术前检查PTC的BRAF V600E基因突变可辅助预测术后复发风险、指导手术切除范围及术后后继治疗。在PTC预后方面，BRAF V600E突变长期预后差，预示着更差的碘摄入及更高的复发概率和病死率。NCCN于2014年第2版甲状腺癌指南中指出，肿瘤的组织学类型、肿瘤大小、局部浸润及坏死、血管浸润以及BRAF基因突变状态和转移是影响预后的重要变量。

免疫组化BRAF V600E（VE1）抗体检测优化多项肿瘤诊断

在实验室检测方面，近几年来，分子生物学检测Sanger测序法和荧光定量-聚合酶链式反应（RT-PCR）一直被用作BRAF基因突变检测，但因Sanger测序法费时、繁琐，且对提取DNA组织要求高，在病理检测中实现常规化困难；RT-PCR检测较为精准，当前使用较多，但其成本高、空间及人员要求高等限制了其进一步推广。而免疫组化技术（IHC）用特异性抗体VE1识别V600E突变蛋白来检测BRAF突变，且与Sanger测序法一致性达95%以上，即使肿瘤样本少的标本也可检测，易于判读，兼具低成本和高效的优势，因此更适合作为初筛手段，正逐渐成为当前BRAF基因突变常用检测方法。

2015年10月在国家癌症中心举行的第一届中美肿瘤诊断病理高峰论坛期间，美国盖辛格健康系统机构（Geisinger Health System）免疫组化实验室主任陈宗明博士分享了一项对比IHC染色与分子生物学检测方法研究，其结果显示，在2,085例CRC患者中发现有24% BRAF V600E突变为阳性；二种检测方法间一致性高达95%-99%，且在验证研究中得到了进一步证实。在结果报告方面，基于阳性、可疑和阴性三个维度上进行：如染色确认阳性，则无需跟进检测；如染色可疑或为阴性，需进行分子生物学检测。

陈宗明博士表示：“进行BRAF V600E IHC检测的关键在于确保检测质量。以CRC诊断为例，BRAF特异性突变IHC检测具有广阔的应用前景，能够通过IHC结果指导测序，在一定程度上简化流程、减少周转时间并降低费用，具有更优的成本效益比。建议将BRAF V600E IHC检测应用于LS、PTC等疾病筛查中，并定期评估其与分子生物学检测间的一致性，做好质量评价与质量控制。”

2015年3月，Nature杂志Scientific Reports子刊发表了一篇来自于中国医学科学院肿瘤医院应建明教授团队的研究，这篇文章主要对Sanger测序、RT-PCR及IHC三种方法学在检测实体瘤BRAF V600E突变中的一致性进行了深入研究。该研究选取779名患者，覆盖611例结直肠癌、127例甲状腺癌及41例恶性黑色素瘤病例，使用罗氏诊断BRAF V600E（VE1）抗体，在Ventana BenchMark全自动染色平台进行IHC检测。779例患者中，150例VE1染色阳性。对349例患者又进行Sanger测序及RT-PCR（cobas® 4800）检测（包括150例VE1阳性病例）。统计结果显示，IHC方法学的灵敏度和特异性分别为100%和99%，可作为BRAF突变检测很好的初筛工具，并对预后和治疗方案提出指导。

作为率先用于体外诊断BRAF突变的即用型抗体，罗氏诊断BRAF V600E（VE1）抗体可联合OptiView DAB IHC检测试剂盒提供具有临床意义的突变检测，其对检测多种肿瘤中单细胞水平BRAF V600E突变具有良好的敏感度和特异性。与现有分子检测方法相比，BRAF V600E（VE1）抗体检测可缩短周转时间，且一种检测即可适用于结直肠癌、甲状腺癌、毛细胞白血病与其他多种癌症中的BRAF V600E突变蛋白诊断，为解剖病理实验室提供快速准确的检测结果，助力临床患者诊疗，有效改善患者管理。